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ames实验原理和方法(Ames实验的原理)

2022-11-03 19:35:08游戏518

大家好,小活来为大家解答以上的问题。什么是ames试验,ames实验这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!

ames实验原理和方法(Ames实验的原理)

1、Ames试验的常规方法有斑点试验和平板掺入试验。

2、1.菌株鉴定 用于测试的菌株,需经基因型和生物学性状鉴定,符合要求才能投入使用。

3、目前推荐使用的一套菌株是TA97、TA98、TA100和TA102。

4、鉴定前先进行增菌培养。

5、为鉴定结果可靠,需同时培养野生型TV菌株,作为测试菌基因型之对照。

6、增菌培养用牛肉膏蛋白胨液体培养基,接种后于37℃,100r/min振荡培养12h左右,细菌生长相为对数期末,含菌数应为1×109个/ml~2×109个/ml。

7、鉴定项目:(1)脂多糖屏障丢失(rfa)用接种环或一端挠起的接种针以无菌操作术取各菌株的增菌培养液,在营养琼脂平板上分别划平行线,然后用灭菌尖头镊夹取灭菌滤纸条,浸湿结晶紫溶液,贴放在平板上与各接种平行线垂直相交。

8、盖好皿盖后倒置于37t温箱,培养24h后观察结果。

9、(2)R因子 划线接种,贴放滤纸条及培养等均同上,唯滤纸条浸湿的药液不同,为氨苄青霉素钠溶液。

10、TA102除pKM101外,还有pAQ1,载有抗四环素的基因,故另用滤纸条浸湿四环素溶液后贴放于划线接种的平板上。

11、(3)紫外线损伤修复缺陷(△uvrB)在营养琼脂平板上按上述方法划线接种后,一半接种线用黑玻璃遮盖,另一半暴露于紫外光下8sec,然后盖好皿盖并用黑纸包裹平皿,防止可见光修复作用。

12、培养同上。

13、(4)自发回变 预先制备底平板;向灭菌并在水浴内保温45℃的上层软琼脂中注入0.1ml菌液;混匀后倾于底平板上并铺平。

14、平皿倒置于37℃温箱培养48h。

15、(5)回变特性——诊断性试验 上层软琼脂中除菌液外,还注入已知阳性物之溶液,需活化系统者并加入S9mix,余同上。

16、组氨酸营养缺陷型由自发回变即可知。

17、2.斑点试验 吸取测试菌增菌培养后的菌液0.1ml,注入融化并保温45℃左右的上层软琼脂中,需S9活化的再加0.3ml-0.4mlS9mix,立即混匀,倾于底平板上,铺平冷凝。

18、用灭菌尖头镊夹灭菌圆滤纸片边缘,纸片浸湿受试物溶液,或直接取固态受试物,贴放于上层培养基的表面。

19、同时做溶剂对照和阳性对照,分别贴放于平板上相应位置。

20、平皿倒置于37℃温箱培养48h。

21、在纸片外围长出密集菌落圈,为阳性;菌落散布,密度与自发回变相似,为阴性。

22、3.平板掺入试验 将一定量样液和0.1ml测试菌液均加入上层软琼脂中,需代谢活化的再加0.3ml-0.4ml S9mix,混匀后迅速倾于底平板上铺平冷凝。

23、同时做阴性和阳性对照,每种处理做3个平行。

24、试样通常设4个~5个剂量。

25、选择剂量范围开始应大些,有阳性或可疑阳性结果时,再在较窄的剂量范围内确定剂量反应关系。

26、培养同上。

27、同一剂量各皿回变菌落均数与各阴性对照皿自发回变菌落均数之比,为致变比(MR)。

28、MR值≥2,且有剂量-反应关系,背景正常,则判为致突变阳性。

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